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FAQ

能否进行荧光终点分析?

可以。这样比较的是反应开始时的荧光和反应结束时的荧光，荧光增强意味着发生了扩增。

4能否支持生物素或荧光标记的寡核苷酸?

支持。在RPA反应中，连有生物素或荧光团的引物与未修饰的引物表现差不多。据悉还没有发现任何差异。

5跑胶前需要回收RPA产物吗?

需要。RPA反应中的物质会干扰琼脂糖电泳，如果不进行产物回收，跑出来的带会出现拖尾。

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样本采集质控重要性

样本采集作为核酸检测的首步，其中涉及的采样耗材和病毒保存液的对检测结果的准确性至关重要，不合格样本会直接影响检验结果。在新冠核酸检测中，不合格样本通常是由于采样问题和采样用具问题导致的。

合格的病毒保存液目前主要要求两点：

1.保证病毒的充分灭活，防止采样、运输和检测过程的风险。

2.保证病毒核酸（RNA）在采集、运输过程中的稳定性，保证检测结果的准确性，防止样本运输保存过程中降解导致检测的“假阴性”。

如何提高扩增曲线的可重复性?

优化扩增曲线考虑以下因素: 对于低拷贝数模板，不稳定扩增可能是因为达到检测限或者是反应混匀程度不同（未混匀的反应扩增效率不佳）。另外，在低温情况下存贮，重组酶和辅助蛋白在50%甘油情况下形成沉淀,也是可能导致不稳定扩增的原因。所以，20x***反应mix在室温下解冻并震荡涡旋将使其成为液体，不影响其功能,并且有效提高扩增效率。不稳定扩增也可能是因为master mix量不足，在加入体系前，用户必须保证震荡后20x***反应组分均一。

目前疑似病例与确诊病例已逾6万例，核酸检测需求量与日俱增。另外，湖北省增加“临床诊断”分类，将疑似病例标准放宽，需要更多保质保量的核酸检测产品投入应用。国家审核批准的新型冠状病毒核酸检测产品大多采取的是“实时荧光RT-PCR检测”方法，RT-PCR需要核酸提取、扩增2个步骤完成，但目前市面上部分注册产品仅有扩增产品，没有核酸提取产品，缺乏系统的核酸检测方案，无法保证核酸检测的系统性、准确性及可靠性，也间接造成了核酸检测遭到社会公众质疑的尴尬局面。因此，当检测产品投入后，可能还需匹配不同厂家的核酸提取试剂，对抗疫工作的开展产生了一定影响。