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等温核酸试剂盒

Milenia HybriDetect 2 横向流动试纸条可用于检测在 TwistFlow? Salmonella 或 TwistAmp?

说明

Milenia HybriDetect 2 横向流动试纸条可用于检测在 TwistFlow? Salmonella 或 TwistAmp? nfo 试剂盒与 TwistAmp? nfo 探针及带标记扩增引物结合使用下生成的扩增产物。Milenia HybriDetect 2 横向流动试纸条可同时检测带 FITC/FAM、生物素配基标记的两种不同扩增子。

Product code: MILENIA02

每盒包含 100 个专门为 RPA 客户生产的试纸条

无需扩增后纯化或杂交

无需使用仪器

两条检测线（外加质控线）可实现多个分析物的检测

与 TwistAmp? nfo 和 TwistFlow? Salmonella 试剂盒完全兼容

什么是RPA?

概念:

重组酶聚合酶扩增（Recombinase Polymerase Amplification，RPA），被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。RPA技术主要依赖于三种酶:能结合单链核酸（寡核苷酸引物）的重组酶、单链DNA结合蛋白（SSB）和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性，适宜反应温度在37°C左右。

试剂盒

英国TwistDx Inc公司开发的重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification，RPA)--被称为是可以替代PCR的核酸检测技术，目前新的等温扩增检测技术。以此为基础的TwistAmp? 核酸扩增产品，能够在15分钟内进行常温下的单分子核酸检测。该技术对硬件设备的要求很低，特别适合用于体外诊断、兽医、食品安全、生物防御和农业等领域。常规PCR必须经过变性、退火、延伸三个步骤，而PCR仪本质上就是一个控制温度升降的设备。RPA反应的适宜温度在37°C - 42°C之间，无需变性，在常温下即可进行。这无疑能大大加快PCR的速度。此外，由于不需要温控设备，RPA可以真正实现便携式的快速核酸检测。据介绍，RPA检测的灵敏度很高，能够将痕量的核酸(尤其是DNA)模板扩增到可以检出的水平，从单个模板分子得到大约1012扩增产物。而且RPA还用不着复杂的样品处理，适用于无法提取核酸的实地检测。RPA不仅可以对扩增产物进行终点检测，还可以对扩增过程进行实时监控，甚至可以通过试纸条(侧流层析试纸条LFD)读取结果。

目前，TwistAmp? 试剂盒的扩增子长度在500bp以内。不过，经过特别优化的RPA扩增，也可以生成更长的扩增产物，或者减慢扩增速度(便于定量)，甚至在更低的温度下进行反应。

如何提高扩增曲线的可重复性?

优化扩增曲线考虑以下因素: 对于低拷贝数模板，不稳定扩增可能是因为达到检测限或者是反应混匀程度不同（未混匀的反应扩增效率不佳）。另外，在低温情况下存贮，重组酶和辅助蛋白在50%甘油情况下形成沉淀,也是可能导致不稳定扩增的原因。所以，20x***反应mix在室温下解冻并震荡涡旋将使其成为液体，不影响其功能,并且有效提高扩增效率。不稳定扩增也可能是因为master mix量不足，在加入体系前，用户必须保证震荡后20x***反应组分均一。